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层析技术概念、原理、分类(凝胶层析和离子交换层析)

发布时间:2023-04-11       点击次数:108

一、概念

利用混和物中各组分理化性质(吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数)的差异,在物质经过两相中进行分离的一种技术。

本世纪初(1903年),俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素,还含有其他色素,实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化、分子生物学及其它学科领域有效的分离、分析工具之一。

二、原理


具体过程:

可分离物质:糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。


三、分类

1.  按两相所处物理状态分类

气相层析:气液层析(固定相为液体)和气固层析(固定相为固体),流动相为气体。

液相层析:液液层析(固定相为液体)和液固层析(固定相为固体),流动相为液体。

2.  按层析方式分类

柱层析:固定相装于柱内,使样品沿着一个方向移动而分离。

薄层层析:将适当粘度的固定相均匀铺在薄板上,点样后,用流动相展开。

纸层析:用滤纸作液体的载体,点样后用流动相展开。

3.  根据层析原理分类:常用分类法

(1)吸附层析:固定相是固体吸附剂,通过对不同溶质吸附力强弱不同进行分离。

(2)分配层析:利用两相中的分配系数不同。

分配系数:当一种溶质在两种给定的互不相溶的溶剂中分配时,在一定温度下达到平衡后,溶质在两相中的浓度比值为一常数,即分配系数(Kd)

Kd=Ca / Cb

Ca和Cb分别代表某一物质在互不相溶的两相,A相(动相)和B相(静相)中的浓度。

(3)离子交换层析:固定相是离子交换剂,各组分与其亲和力不同

(4)凝胶层析:固定相是多孔凝胶,根据流动相中溶质的分子量大小差异进行分离

(5)亲和层析:利用固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的配基,与溶质分子发生可逆的特异性结合进行分离

(6)金属螯合层析

(7)疏水层析

(8)反相层析

TEL:15216781845