将载有 pUC19 或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌体 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合细菌悬浮液置于琼脂培养皿中,在 37°C 下培养过夜。 将培养皿在 4°C 下冷却30 分钟,将菌落(直径大约 1– 2 mm)转印至一片 82 mm 直径的 Immobilon-Ny+ 圆片膜上,或转印至竞争产品带正电的尼龙膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm, 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交联。 然后用 a 32P 标记的 DNA 探针对膜进行杂交,并使用磷屏成像系统显色。
Immobilon-NC 转印膜
Immobilon-NC 转印膜是一种经济型选择,用于核酸和蛋白质印迹实验方案。 这种转印膜是 Southern、colony/plaque 以及蛋白质实验方案中zui初使用的膜。 NC HATF 所含的混合纤维素酯基质,不含在细胞生长过程中会干扰细胞壁完整性的表面活性剂。 这些膜用于 colony lifts。 NC HAHY 所含的混合纤维素酯基质,所带的表面活性剂能够增强可湿性以及转印过程中的处理能力。 两种膜对核酸和蛋白质都具有高吸附容量。 适用于常规转印。